Western及IP細(xì)胞裂解液 100ml  CS301-100

IP Lysis Buffer

簡(jiǎn)介：

Western 及 IP 裂解緩沖液，是一種非變性條件下的裂解液,為您提供完整的組織、細(xì)胞總蛋白制備方案。裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP和Co-IP等實(shí)驗(yàn)。

(一) 細(xì)胞樣品

1.取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的＊終濃度為1 mM。

2. 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS或生理鹽水清洗細(xì)胞一遍。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

3.懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞,按照6孔板每孔細(xì)胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。

4.充分裂解后，12000g 4℃離心3- 10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

組織樣品：

1.取 50-100 mg 組織,把組織切成細(xì)小的碎片。

2. 取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的＊終濃度為1 mM。

3.按照每20 mg組織加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。

4.用玻璃勻漿器勻漿，直到 95％的細(xì)胞被破碎

5.充分裂解后，12000g 4℃離心3- 10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。